永生性的細(xì)胞可以無(wú)限制的生長(zhǎng)，當(dāng)生長(zhǎng)一定數(shù)量之后，由于空間的限制和接觸性抑制，細(xì)胞不再生長(zhǎng)，甚至可能死亡，因此細(xì)胞需要減少密度，以至于細(xì)胞得以生長(zhǎng)和存活。對(duì)于細(xì)胞保存，我們將細(xì)胞保存在液氮罐中，使用細(xì)胞時(shí)，需要將細(xì)胞復(fù)蘇。

技術(shù)原理：

細(xì)胞復(fù)蘇：從液氮中取出凍存管，于37℃水浴鍋中至冰晶溶解，凍存管中的液體轉(zhuǎn)移至離心管，離心后，棄上清，加入完全培養(yǎng)基吹打混勻后，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶，于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

細(xì)胞傳代：PBS清洗，胰蛋白酶消化，完全培養(yǎng)基終止消化，離心機(jī)離心，留1/3的細(xì)胞混合液轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)

細(xì)胞凍存：重懸得到細(xì)胞液，取1.5ml重懸細(xì)胞液，加入10%細(xì)胞級(jí)DMSO，放入梯度凍存盒內(nèi)，放置-80度冰箱，3天后，將凍存管移至液氮內(nèi)。